流式細胞儀(yi) 用濾光片
流式細胞術是一種用於(yu) 分析流體(ti) 中大量熒光標記細胞的技術。當粒子通過聚焦光源時,可以測量散射光的量和熒光標記的發射。流式細胞術是基礎研究中非常重要的工具,用於(yu) 研究細胞功能的許多方麵,並已成為(wei) 血細胞和癌症診斷領域中非常重要的臨(lin) 床技術。
為(wei) 什麽(me) 要考慮將 Semrock 濾光片用於(yu) 流式細胞儀(yi) ?
隨著高性能流式細胞儀(yi) 的發展趨勢是在可見光和近紅外波長下使用多個(ge) 激光器和大量檢測通道,擁有合適的濾光片對於(yu) 更*地區分更多熒光團至關(guan) 重要。Semrock 濾光片在市場上所有濾光片中具有最高的透射率,這意味著您可以獲得更好的靈敏度。我們(men) 出色的激光純化濾光片/激光消雜濾光片選擇使您可以為(wei) 氣體(ti) 或 DPSS 激光器選擇超窄帶通濾光片,或者為(wei) 具有相似波長的多個(ge) 激光器或二極管或光泵浦半導體(ti) 激光器的係統選擇更寬的帶通濾光片,其輸出可從(cong) 激光到激光,隨著溫度或老化。Semrock 發射濾光片提供卓/越的激光線阻擋 (OD>6)
光學密度(Optical Density或稱為(wei) OD)是描述光通過高度阻擋的光學濾光片(當光的傳(chuan) 輸非常小時)的透過率的一種方便工 具。OD簡單地定義(yi) 為(wei) 對數(底為(wei) 10)的負變量。變量在0和1之間變化(OD = – log10(T))。因此,透過率就簡單等於(yu) 10的負OD值的 方 (T = 10– OD), 左圖顯示了OD的影響:6個(ge) 數量級(1000000次)的透過率變化,非常簡單地用介於(yu) 0到6的數字來表示;下麵中間 的示例表和右下的“法則”列表提供了一些方便的技巧,可以在 OD 和透過率之間快速轉換。將變量 T 乘以2(或除以10)等於(yu) 減 去0.3(或加上1),就轉換成了 OD 。
光密度本底噪聲:
通過精心優(you) 化我們(men) 的測量設備和方法,Semrock能夠提供一些優(you) 化的寬帶光密度(OD)。以下是此網站上顯示的大多數測量數據的典型OD噪聲本底限製。
對於(yu) 介於(yu) 320和1120 nm之間的波長,接近或低於(yu) 3e-7(光學密度6.5)的透射值受到測量噪聲的限製。
對於(yu) 波長<320 nm且在1120-1500 nm之間的波長,接近或低於(yu) 3e-6(光學密度5.5)的透射值受到測量噪聲的限製。
對於(yu) 大於(yu) 1500 nm的波長,接近或低於(yu) 1e-5(光學密度5.0)的透射值受到測量噪聲的限製。
同樣,對於(yu) 某些濾光片和/或某些阻擋波長範圍,顯示的本底噪聲僅(jin) 為(wei) OD 4。
激光對濾光片的損傷(shang) 程度取決(jue) 於(yu) 多重因素,因此很難保證濾光片在所有可能情況下的性能。然而,確定激光損傷(shang) 閾值(LDT)是有用的,使脈衝(chong) 通量或強度低於(yu) 該閾值就不太可能損害濾光片。
激光損傷(shang) 閾值計算器
Semrock的激光損傷(shang) 閾值計算器僅(jin) 供參考/指導用途。
LDT計算器不適用的情況:LIDT試驗中激光損壞僅(jin) 為(wei) 某項關(guan) 鍵參數時。即:此計算器僅(jin) 適用於(yu) 激光是唯/一的損傷(shang) 源,環境中沒有其他的損傷(shang) 源,如分子汙染、物理汙染、安裝應力、溫度等環境變量,大多數光學器件從(cong) 未達到理想的計算LDT。LDT計算器根據標稱規格按激光波長和脈衝(chong) 持續時間進行縮放,但應注意的是,盡管方程式在納秒範圍內(nei) 相當線性地縮放,但當切換為(wei) 皮秒級時,損傷(shang) 機理從(cong) 主要是熱破壞變為(wei) 電子擊穿。脈衝(chong) 持續時間。最後,大多數光學器件將具有特定的區域,這些區域由於(yu) 材料吸收而具有較低的激光損傷(shang) 閾值,其中包括OH線和較低的UV波長範圍。
某個(ge) 產(chan) 品的激光損傷(shang) 閾值是多少?
LDT規格可在“規格”選項卡的“光學損壞等級”標題下的每個(ge) 產(chan) 品網頁上找到。或者使用計算器,在第一項下拉菜單“Product Family”中選擇對應的產(chan) 品係列。該係列產(chan) 品的激光損傷(shang) 閾值即會(hui) 出現在計算器頁麵的右邊。
如何使用激光損傷(shang) 閾值LDT計算器?
IBS離子束濺射硬鍍膜的Semrock濾光片提供了高的激光損傷(shang) 閾值,但是這不意味著其可以接受無上限的激光強度,更關(guan) 鍵的是,你需要計算出安全使用的光斑大小,在此之內(nei) 使用。使用此LDT激光損傷(shang) 閾值計算器,屬於(yu) 激光器的類型和功率等參數,然後嚐試變化使用的光斑大小,直到綠色的安全信號出現。
各種不同類型的激光器是如何造成濾光片損傷(shang) 的?
脈衝(chong) 激光器對比連續波激光器: 脈衝(chong) 激光器在一係列持續時間 τ 為(wei) 的脈衝(chong) 中以重複率 R 和峰值能量 Ppeak發射光,連續波(cw)激光器以恒定功率P發射穩定的光束。大多數激光器的脈衝(chong) 激光平均功率 Pavg 和連續激光恒定功率通常在幾毫瓦(mW)到瓦特(W)之間。本注釋末尾的表格總結了用於(yu) 表征脈衝(chong) 激光器輸出的關(guan) 鍵參數。
下表概述了三種主要類型的激光器預計會(hui) 發生激光損傷(shang) 的條件。
單位: P 用 Watts; R 用Hz; 直徑 用 cm; LDTLPin J/cm2.
注意: lspec 和tspec 分別是波長和脈衝(chong) 寬度, 在其中 LDTLP 已指/定。
* 連續波激光器和準連續波激光器的情況是粗略的估計,不作為(wei) 保證規格。
長脈衝(chong) 激光器:
通常根據 “長脈衝(chong) 激光器” 的脈衝(chong) 密度來指/定長脈衝(chong) 的損傷(shang) 閾值。因為(wei) 脈衝(chong) 之間的時間是如此之大(毫秒),受輻照的材料能夠熱放鬆-因此損壞通常不是熱誘導的, 而是由幾乎瞬間的電介質擊穿引起的。通常損壞的結果是材料的表麵或體(ti) 積缺陷以及附近的不規則光場特性。Semrock濾光片 LDTLP 1 J/cm2 ,因此被認為(wei) 是 “高功率激光質量” 組件。一個(ge) 重要的例外是窄帶激光線濾光片,其內(nei) 部場強強烈地集中在幾層薄膜塗層中,從(cong) 而產(chan) 生了大約小一個(ge) 數量級的 LDTLP 。
連續(cw)激光器:
cw 激光器的損壞往往是由熱 (加熱) 效應引起的。基於(yu) 這個(ge) 原因,對於(yu) cw 激光器,LDTCW更加依賴於(yu) 樣品的材料和幾何性質,因此,與(yu) 長脈衝(chong) 激光器不同,用單個(ge) 數量來指/定是更加困難的。基於(yu) 這個(ge) 原因,Semrock 不測試也不指/定其濾光片產(chan) 品的 LDTCW 。作為(wei) 一個(ge) 很大概的規則,許多全玻璃組件,如介質膜的反射鏡和濾光片都有一個(ge) LDTCW (強度指/定為(wei) kW/ cm2 ) ,這個(ge) 值至少是長脈衝(chong) 激光激光損傷(shang) 閾值LDTLP 的10倍(指/定為(wei) 強度來定量,單位是 J/cm2)。
準連續激光:
準連續激光是在飛秒 (fs) 到皮秒 (ps) 範圍內(nei) ,脈寬 τ 的脈衝(chong) 激光。而且,高功率激光器的重複頻率通常在 10-100 MHz 左右。這些激光器通常是鎖模的,這意味著頻率由激光腔內(nei) 的光的往返時間決(jue) 定的。這樣高的重複頻率,脈衝(chong) 之間的時間非常短,不可能發生熱鬆弛。因此,在 LDT 方麵,準連續激光通常大概按照類似連續激光器處理,使用平均強度代替連續激光強度。
舉(ju) 例: 雙頻 Nd:YAG 激光器,波長為(wei) 532 nm,假設該激光器的參數為(wei) : τ = 10 ns, R = 10 Hz, 和 Pavg = 1 W. 那麽(me) D = 1 x10–7,E = 100 mJ, 並且 Ppeak= 10 MW. 對於(yu) 光斑直徑 = 100 μm, F = 1.3 kJ/cm2, 所以某產(chan) 品 LDTLP = 1 J/cm2 就和可能被損壞. 但是,如果使用時的光斑直徑 = 5 mm, F = 0.5 J/cm2, 此時,這個(ge) 濾光片產(chan) 品就很可能不會(hui) 被損壞。